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      解析PCR實驗的原理、分類及品牌市場

      2018-04-23 14:30:29 / 龍騰電力 / 0 / admin

      PCR概念

        聚合酶鏈反應(基因擴增):基本原理 類似于DNA的天然復制過程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR是模擬體內DNA復制過程,在體外特異性擴增DNA片段的一種技術。

        PCR的應用領域

        1、遺傳病和某些疑難病的診斷

        2、病原體的檢測。某些惡性疾病一般用微生物學、生化和免疫 學技術無法查出病原體時,可用PCR來檢查。

        3、法醫和刑偵鑒定。

        4、癌基因的檢查。

        5、基因探針的制備。

        6、基因組測序、染色體巡視。

        7、cDNA庫的構建。

        8、基因突變的分析和定位誘變。

        9、DNA重組。

        10、基因的分享和克隆。

        標準的PCR過程分為三步

        DNA變性

        (90℃-96℃):雙鏈DNA模板在熱作用下,氫鍵斷裂,形成單鏈DNA

        退火

        (60℃-65℃):系統溫度降低,引物與DNA模板結合,形成局部雙鏈。

        延伸

        (70℃-75℃):在Taq酶(在72℃左右,活性最佳)的作用下,以dNTP為原料,從引物的3′端開始以從5′??′端的方向延伸,合成與模板互補的DNA鏈。

        PCR儀的分類

        根據DNA擴增的目的和檢測的標準可以將PCR儀分為普通PCR儀,梯度PCR儀,原位PCR,實時熒光定量PCR儀等幾類。

        普通PCR儀

        一般把一次PCR擴增只能運行一個特定退火溫度的PCR儀,稱之為普通PCR儀。如果要用它做不同的退火溫度則需要多次運行。主要是用作簡單的,對目的基因退火溫度的擴增。

        梯度PCR儀

        一次性PCR擴增可以設置一系列不同的退火溫度條件(通常12種溫度梯度)的稱之為梯度PCR儀。因為被擴增的不同的DNA片段其最適合的退火溫度不同,通過設置一系列的梯度退火溫度進行擴增,從而一次性PCR擴增就可以篩選出表達量高的最適合退火溫度進行有效的擴增。主要用于研究未知DNA退火溫度的擴增,這樣既節約時間,也節約經費。在不設置梯度的情況下亦可當做普通的PCR用。

        原位PCR儀

        是用于從細胞內靶DNA的定位分析的細胞內基因擴增儀。如病原基因在細胞的位置或目的基因在細胞內的作用位置等??杀3旨毎蚪M織的完整性,使PCR反應體系滲透到組織和細胞中,在細胞的靶DNA所在的位置進行基因擴增。不但可以檢測到靶DNA,還能標出靶序列在細胞內的位置。于分子和細胞水平上研究疾病的發病機理和臨床過程及病理的轉變有著重大的實用價值。

        實時熒光定量PCR儀

        在普通PCR儀基礎上增加一個熒光信號采集系統和計算機分析處理系統,就成了熒光定量PCR。其PCR擴增原理和普通PCR擴增原理相同,只是在PCR擴增時加入的引物是利用同位素、熒光素等進行標記,使用引物和熒光探針同時與模板特異性結合擴增。擴增的結果通過熒光信號采集系統實時采集信號連接輸送到計算機分析處理系統,得出量化的實時結果輸出。

        熒光定量PCR儀有單通道,雙通道和多通道之分。當只用一種熒光探針標記的時候,選用單通道;有多種熒光標記的時候使用多通道。單通道也可以檢測多熒光的標記和目的基因表達產物,因為一次只能檢測一種目的基因的擴增量,需多次擴增才能檢測完不同的目的基因片段的量。

        PCR的各個品牌

        國產品牌

        上海領成、西安天隆、杭州郎基、珠海黑馬、杭州博日、上海宏石、廈門安普利、杭州晶格、北京亞力恩、北京東勝、上海楓嶺。

        目前國內市場主要被:上海領成,西安天隆,杭州郞基,珠海黑馬,杭州博日五大品牌所占有。

        普通PCR儀價格在18000-20000元左右,梯度PCR儀價格在26000-28000元左右,實時熒光定量PCR儀價格在130000-150000元左右。

        進口品牌

        美國ABI、美國Labnet萊伯特、美國Bio-rad伯樂、英國Genetech、英國Techne、德國Eppendorf艾本德、新加坡Esco藝思高、日本TaKaRa、日本ASTEC、澳大利亞Corbett柯柏特、德國Jena耶拿、德國biometra、德國BOECO、英國CLEAVER科麗沃、瑞士ROCHE羅氏、英國Quanta、德國PEQLAB、荷蘭Creacon、美國Cepheid、美國Thermo熱電。

        目前進口品牌中美國ABI,美國labnet,美國Bio-rad,日本TaKaRa,英國Techne,德國Eppendorf六大品牌占有率比較高。

        根據近年來銷量分析,其中美國ABI除了9700型普通PCR基因擴增儀和2720型基因擴增儀外,新推出的高精確性的Veriti梯度PCR儀,也是所有進口品牌梯度PCR儀中最受客戶認可的一款,是近兩年來銷量較高一款PCR儀;

        其次是美國Bio-rad;

        日本TaKaRa和美國Labnet梯度PCR儀,價格相對進口品牌中比較便宜,質量和性能也比較穩定,從而深廣大客戶的認可,他們的銷售成交價在45000-50000左右,而其它同性能價格的儀器價格在,60000-80000元,所以近年來市場的占有率呈上升的趨勢;

        德國Eppendorf和美國Bio-rad是以直銷的模式銷售,因其壟斷直銷方式,外面的經銷商或者當地的經銷商無法進去競爭,所以相同性能的產品價格相對其他品牌要高很多,成交價格一般在7-9萬元左右,市場占有率相對有所下降;

        英國Techne在國內生產,價格相對進口品牌中要低很多,銷量有所上升,市場占有率也上升,價格在35000-40000元左右。

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